മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് റിയൽ ടൈം പിസിആർ കിറ്റ്
ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ വിവരം
ഉദ്ദേശിക്കുന്ന ഉപയോഗത്തിന്
തത്സമയ പിസിആർ സംവിധാനങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ഹ്യൂമൻ സെറം അല്ലെങ്കിൽ ലെഷൻ എക്സുഡേറ്റ് സാമ്പിളുകളിൽ മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് കണ്ടെത്തുന്നതിന് ഇത് ഉപയോഗിക്കുന്നു.
ടെസ്റ്റ് തത്വം
ഈ ഉൽപ്പന്നം ഒരു ഫ്ലൂറസെന്റ് പ്രോബ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള Taqman® റിയൽ-ടൈം PCR പരിശോധനാ സംവിധാനമാണ്.മങ്കിപോക്സ് വൈറസിന്റെ F3L ജീൻ കണ്ടുപിടിക്കുന്നതിനാണ് പ്രത്യേക പ്രൈമറുകളും പ്രോബുകളും രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത്.മനുഷ്യന്റെ സംരക്ഷിത ജീനിനെ ലക്ഷ്യം വച്ചുള്ള ആന്തരിക നിയന്ത്രണം തെറ്റായ-നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ ഒഴിവാക്കാൻ സാമ്പിൾ ശേഖരണം, സാമ്പിൾ കൈകാര്യം ചെയ്യൽ, തത്സമയ പിസിആർ പ്രക്രിയ എന്നിവ നിരീക്ഷിക്കുന്നു.ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എൻസൈം, യുഡിജി എൻസൈം, റിയാക്ഷൻ ബഫർ, സ്പെസിഫിക് പ്രൈമർ, പ്രോബ്: മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് കണ്ടെത്തുന്നതിന് ആവശ്യമായ സാമഗ്രികൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന പൂർണ്ണമായ പ്രീമിക്സ് ലയോഫിലൈസ്ഡ് സിസ്റ്റമാണ് കിറ്റ്.
പ്രധാന ഉള്ളടക്കം
നൽകിയിരിക്കുന്ന ഘടകങ്ങൾ പട്ടികയിൽ പട്ടികപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.
| ഘടകങ്ങൾ | പാക്കേജ് | ഘടകം |
| മങ്കിപോക്സ് വൈറസ്ലിയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രീമിക്സ് | 8 സ്ട്രിപ്പ് PCR ട്യൂബുകൾ× 6 പൗച്ചുകൾ | പ്രൈമറുകൾ, പ്രോബുകൾ, dNTP/dUTP മിക്സ്, Mg2+, Taq DNA പോളിമറേസ്, UDG എൻസൈം |
| MPV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ | 400 μL×1 ട്യൂബ് | ടാർഗറ്റ് ജീൻ അടങ്ങിയ ഡിഎൻഎ സീക്വൻസുകൾ |
| MPV നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം | 400 μL×1 ട്യൂബ് | മനുഷ്യ ജീൻ സെഗ്‌മെന്റ് അടങ്ങിയ ഡിഎൻഎ സീക്വൻസുകൾ |
| പിരിച്ചുവിടൽ പരിഹാരം | 1 മില്ലി × 1 ട്യൂബ് | സ്റ്റെബിലൈസർ |
| അനുരൂപതയുടെ സർട്ടിഫിക്കറ്റ് | 1 കഷ്ണം | / |
ഓപ്പറേഷൻ ഫ്ലോ
1. സാമ്പിൾസമാഹാരം:അണുവിമുക്തമായ ട്യൂബുകളിലേക്ക് മാതൃക ശേഖരിക്കണം
സാധാരണ സാങ്കേതിക സവിശേഷതകളോടെ.
2. റീജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ (റിയാജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ ഏരിയ)
കിറ്റിന്റെ ഘടകങ്ങൾ പുറത്തെടുക്കുക, സ്റ്റാൻഡ്ബൈ ഉപയോഗത്തിനായി ഊഷ്മാവിൽ സന്തുലിതമാക്കുക.
3. സ്പെസിമെൻ പ്രോസസ്സിംഗ് (മാതൃക പ്രോസസ്സിംഗ് ഏരിയ)
3.1 ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ
വൈറൽ ഡിഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകളുടെ അനുബന്ധ ആവശ്യകതകളും നടപടിക്രമങ്ങളും അനുസരിച്ച് 200μL ലിക്വിഡ് സാമ്പിളുകൾ, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിനുള്ള നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ എന്നിവ എടുക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
3.2 ലയോഫിലൈസ്ഡ് പൊടി പിരിച്ചുവിടലും ടെംപ്ലേറ്റ് കൂട്ടിച്ചേർക്കലും
സാമ്പിളുകളുടെ എണ്ണം അനുസരിച്ച് മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് ലയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രീമിക്സ് തയ്യാറാക്കുക.ഒരു സാമ്പിളിന് Lyophilized premix പൗഡർ അടങ്ങിയ ഒരു PCR ട്യൂബ് ആവശ്യമാണ്.നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണവും പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണവും രണ്ട് സാമ്പിളുകളായി കണക്കാക്കണം.
(1) Lyophilized premix അടങ്ങിയ ഓരോ PCR ട്യൂബിലേക്കും 15μL ഡിസോൾവിംഗ് സൊല്യൂഷൻ ചേർക്കുക, തുടർന്ന് ഓരോ PCR ട്യൂബിലേക്കും യഥാക്രമം 5μL വേർതിരിച്ചെടുത്ത സാമ്പിളുകൾ/ നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ/പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ചേർക്കുക.
(2) PCR ട്യൂബുകൾ ദൃഡമായി മൂടുക, ലയോഫൈലൈസ്ഡ് പൗഡർ പൂർണ്ണമായി അലിഞ്ഞു ചേരുന്നത് വരെ PCR ട്യൂബുകൾ കൈകൊണ്ട് ഫ്ലിക്കുചെയ്യുക, തൽക്ഷണം ലോ-സ്പീഡ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴി ദ്രാവകം PCR ട്യൂബുകളുടെ അടിയിലേക്ക് ശേഖരിക്കുക.
(3) കണ്ടുപിടിക്കാൻ സാധാരണ തത്സമയ PCR ഉപകരണം ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, PCR ട്യൂബുകൾ നേരിട്ട് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഏരിയയിലേക്ക് മാറ്റുക;കണ്ടെത്തുന്നതിന് BTK-8 ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, ഇനിപ്പറയുന്ന പ്രവർത്തനങ്ങൾ നടത്തേണ്ടതുണ്ട്: PCR ട്യൂബിൽ നിന്ന് 10 μL ദ്രാവകം BTK-8 ന്റെ പ്രതികരണ ചിപ്പ് കിണറിലേക്ക് മാറ്റുക.ഒരു PCR ട്യൂബ് ചിപ്പിലെ ഒരു കിണറുമായി യോജിക്കുന്നു.പൈപ്പിംഗ് പ്രവർത്തന സമയത്ത്, പൈപ്പറ്റ് 90 ഡിഗ്രി ലംബമാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.എയറോസോൾ ബാരിയർ പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ കിണറിന്റെ മധ്യഭാഗത്ത് മിതമായ ശക്തിയോടെ സ്ഥാപിക്കുകയും ആദ്യത്തെ ഗിയറിലെത്തുമ്പോൾ പൈപ്പറ്റ് തള്ളുന്നത് നിർത്തുകയും വേണം (കുമിളകൾ ഒഴിവാക്കാൻ).കിണറുകൾ നിറഞ്ഞതിന് ശേഷം, എല്ലാ കിണറുകളും മറയ്ക്കുന്നതിന് ഒരു പ്രതികരണ ചിപ്പ് മെംബ്രൺ പുറത്തെടുക്കുക, തുടർന്ന് ചിപ്പ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയയിലേക്ക് മാറ്റും.
4. PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (ഡിറ്റക്ഷൻ ഏരിയ)
4.1 പിസിആർ ട്യൂബുകൾ/റിയാക്ഷൻ ചിപ്പ് റിയാക്ഷൻ ടാങ്കിലേക്ക് ഇടുക, ഓരോ പ്രതികരണത്തിന്റെയും പേരുകൾ ഉചിതമായ ക്രമത്തിൽ സജ്ജമാക്കുക.
4.2 കണ്ടെത്തൽ ഫ്ലൂറസെൻസിൻറെ ക്രമീകരണങ്ങൾ: (1) മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് (FAM);(2) ആന്തരിക നിയന്ത്രണം (CY5).
4.3 ഇനിപ്പറയുന്ന സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio എന്നിവയുടെ പ്രോട്ടോക്കോൾ:
| പടികൾ | താപനില | സമയം | സൈക്കിളുകൾ | |
| 1 | പ്രീ-ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 2 മിനിറ്റ് | 1 |
| 2 | ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 10 സെ | 45 |
| അനീലിംഗ്, എക്സ്റ്റൻഷൻ, ഫ്ലൂറസെൻസ് ഏറ്റെടുക്കൽ | 60℃ | 30 സെ | ||
BTK-8-ന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ:
| പടികൾ | താപനില | സമയം | സൈക്കിളുകൾ | |
| 1 | പ്രീ-ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 2 മിനിറ്റ് | 1 |
| 2 | ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 5 സെ | 45 |
| അനീലിംഗ്, എക്സ്റ്റൻഷൻ, ഫ്ലൂറസെൻസ് ഏറ്റെടുക്കൽ | 60℃ | 14 സെ | ||
5. ഫലങ്ങളുടെ വിശകലനം (ഇൻസ്ട്രുമെന്റ് യൂസർ മാനുവൽ കാണുക)
പ്രതികരണത്തിന് ശേഷം, ഫലങ്ങൾ യാന്ത്രികമായി സംരക്ഷിക്കപ്പെടും.വിശകലനം ചെയ്യാൻ "വിശകലനം" ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക, ഫലം കോളത്തിലെ ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും Ct മൂല്യങ്ങൾ ഉപകരണം സ്വയമേവ വ്യാഖ്യാനിക്കും.നെഗറ്റീവ്, പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഫലങ്ങൾ ഇനിപ്പറയുന്ന "6. ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം" പാലിക്കും.
6. ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
6.1 നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം: FAM ചാനലിൽ Ct അല്ലെങ്കിൽ Ct>40 ഇല്ല, സാധാരണ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉള്ള CY5 ചാനലിൽ Ct≤40.
6.2 പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ: സാധാരണ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉള്ള FAM ചാനലിൽ Ct≤35, സാധാരണ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഉള്ള CY5 ചാനലിൽ Ct≤40.
6.3 മുകളിൽ പറഞ്ഞ എല്ലാ മാനദണ്ഡങ്ങളും പാലിച്ചാൽ ഫലം സാധുവാണ്.അല്ലെങ്കിൽ, ഫലം അസാധുവാണ്.
ഫല വ്യാഖ്യാനം
ഇനിപ്പറയുന്ന ഫലങ്ങൾ സാധ്യമാണ്:
| FAM ചാനലിന്റെ Ct മൂല്യം | CY5 ചാനലിന്റെ Ct മൂല്യം | വ്യാഖ്യാനം | |
| 1# | Ct അല്ലെങ്കിൽ Ct>40 ഇല്ല | ≤40 | മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് നെഗറ്റീവ് |
| 2# | ≤40 | എന്തെങ്കിലും ഫലങ്ങൾ | മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് പോസിറ്റീവ് |
| 3# | 40-45 | ≤40 | വീണ്ടും പരിശോധന;അത് ഇപ്പോഴും 40~45 ആണെങ്കിൽ, 1# ആയി റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യുക |
| 4# | Ct അല്ലെങ്കിൽ Ct>40 ഇല്ല | Ct അല്ലെങ്കിൽ Ct>40 ഇല്ല | അസാധുവാണ് |
കുറിപ്പ്: അസാധുവായ ഫലം സംഭവിക്കുകയാണെങ്കിൽ, സാമ്പിൾ ശേഖരിച്ച് വീണ്ടും പരിശോധിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
ഓർഡർ വിവരം
| ഉത്പന്നത്തിന്റെ പേര് | പൂച്ച.ഇല്ല | വലിപ്പം | മാതൃക | ഷെൽഫ് ലൈഫ് | ട്രാൻസ്.& സ്റ്റോ.താപനില |
| മങ്കിപോക്സ് വൈറസ് റിയൽ ടൈം പിസിആർ കിറ്റ് | B001P-01 | 48 ടെസ്റ്റുകൾ/കിറ്റ് | സെറം/ ലെഷൻ എക്സുഡേറ്റ് | 12 മാസം | -25～-15℃ |
